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Sigma蛋白酶K是怎樣應用在分子生物學中的

發(fā)布時間: 2020-08-25  點擊次數(shù): 3601次
   Sigma蛋白酶K是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質(zhì)的一般降解。從林伯氏白色念球菌中純化得到。蛋白酶K是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經(jīng)純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中穩(wěn)定,還具有降解天然蛋白質(zhì)的能力。
 
  Sigma蛋白酶K是怎樣應用在分子生物學中的
  線粒體分離
  核酸純化產(chǎn)物的蛋白質(zhì)消解。在分子生物學應用中,蛋白酶K常用于消解無用的蛋白質(zhì),例如從微生物、培養(yǎng)細胞和植物的DNA或RNA制劑中消解核酸酶。在核酸制劑之中,這種酶的使用濃度通常為50-200µg/ml,pH7.5-8.0,37°C。孵育時間30分鐘至18小時不等。盡管在長期孵育時,蛋白酶K可以自動消解,但通常還是通過后續(xù)的本分萃取法使其變性。
  蛋白酶K已經(jīng)用于去除陽離子蛋白質(zhì)上結(jié)合的內(nèi)毒素,如溶菌酶和核糖核酸酶A上的內(nèi)毒素。
 
  確定酶在膜上的分布
  處理石蠟包埋的組織,以便暴露抗原結(jié)合位點進行抗體標記。
 
  去除核酸酶進行原位雜交
  傳染性海綿狀腦病(TSE)朊病毒研究及草擬的診斷測試方法利用蛋白酶K消解來自大腦組織樣本的蛋白質(zhì)。
  采用蛋白酶K消解法進行蛋白酶足跡實驗,去除蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)表面互作。
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